1. 掌握冠状病毒标本的采集、核酸检测方法;
2. 掌握中医辨证治常见冠状病毒肺炎等疫病的诊疗思维;
3. 掌握冠状病毒感染的中医证候类型、传变规律及其辨证治疗
4. 了解BSL-3实验室环境要求、设备配置、个人防护及在此环境中的操作流程及规范;
5. 培养中西医并重中西医结合的应用思维;
6. 培养传承精华、守正创新的价值观。
1)病毒的核酸提取与定量PCR
磁珠法提取核酸的基本原理是利用核酸和磁性珠子发生磁性结合作用来分离核酸。磁性珠子主要由磁性材料、表面活性剂和改性剂组成,其表面活性剂可以与核酸紧密结合,使其容易与磁性珠子发生磁性结合。将样品与结合缓冲液和磁珠混合,核酸与磁珠结合后,经过数次洗涤与磁珠磁场捕获,洗脱获得核酸。
RT-qPCR通过逆转录酶逆转录病毒单链RNA生成结构稳定的互补DNA(cDNA),以病毒某一高度保守的基因序列为检测靶标,并与相应的荧光染料一起进行PCR扩增。经过多个变性、退火、延伸的循环,荧光信号强度与靶标基因扩增量呈等比例指数增加,其中在指数扩增阶段,PCR产物量的对数值与其起始模板量之间存在线性关系。通过检测数值可以分析所检测的病毒载量。
2)温病理论用于冠状病毒感染诊治:
呼吸道冠状病毒感染属于中医温病范畴。温病病邪多具有传染性,可在短时间内在人群中连续传播,引起程度不等的蔓延、扩散。其病程具有阶段性,一般初起多有恶寒发热表证;继则邪热传里,恶寒消失,热势转甚,症见壮热烦渴,甚或出现神志异常及出血倾向;后期多见低热不退,邪少虚多;或邪退而留下后遗症。上述过程一般内伤杂病不具备,是区分温病和内伤杂病的主要依据。温病病程阶段性变化,可用卫分、气分、营分、血分来概括。辨证准确性是临床疗效的前提。根据不同性质温邪(如风热病邪、湿热病邪、燥热病邪等)、温邪侵犯的病位、人体体质、转归等差异,入侵卫分、气分、营分、血分所产生的的临床症状各具特点,即卫气营血各病理阶段下辖具体证候类型。法随证立,在辨证基础上根据证型,确立治法。方从法出,在确立治法基础上确定与患者病机最切合的方剂。