步骤1：
实验简介：掌握本虚拟仿真实验的原理、方法、步骤，为后续操作提供依据。要求学生点击查看每一个菜单，认真学习，最后完成预习自测。
步骤2：
临床治疗（1）：掌握正确穿戴防护服的顺序
要求学生能够对给定的物品进行正确的穿戴，掌握清洁区穿戴物品及顺序、半污染区穿戴物品及顺序，最终获得正确的结果，点击“完成”。
步骤3：
临床治疗（2）：掌握新冠病毒患者的临床类型判别标准（如下图）。
要求学生掌握下图新冠病毒肺炎患者的类型判别标准，根据对话进行合理判断。
步骤4：
临床治疗（3）：清肺排毒汤组方原理和组成
清肺排毒汤组方组方来源于麻杏石甘汤、射干麻黄汤、小柴胡汤、五苓散，适用范围于新冠肺炎轻型、普通型患者。
组方：生石膏15~ 30g (先煎)、麻黄9g、炙甘草6g、杏仁9g、桂枝9g 、泽泻9g 、猪苓9g、白术9g、茯苓15g、柴胡16g、 黄芩6g 、姜半夏9g、生姜9g、紫菀9g 、冬花9g、射干9g、细辛6g、山药12g、枳实6g 、陈皮6g、藿香9g。
要求学生能够把组方中的中药全部选出。
步骤5：
临床治疗（4）：对于感染性疾病，临床治疗控制、出院标准及出院证明
要求学生对临床发热疾病的一般临床观察，掌握出院标准：新冠病毒核酸阴性、连续3天体温正常。
出院证明的正确格式如下：
步骤6：
临床治疗（5）：标本采集原则，血清制备方法和离心机使用
血清室温静置10~15min后，血清离心分离三个要点：平衡、转速3000rpm、时间10min。将采集血清做好标记，放-80°C保存。
动态图示离心分离血清的原理：离心可以使血细胞沉降到试管底部，上清为纯净的澄清的血清。要求学生在吸取血清时，避免扰动下层血细胞。
步骤7：
实验操作（1）：实验准备，掌握MSD实验所需耗材和试剂
检查试剂盒试剂：抗体稀释液Diluent 2（无色，稀释标准品和血清样本）、标准品（冻干粉）、血清样本（1.5ml冻存管）、10种检测抗体（anti-IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-13和TNF-α）、抗体稀释液缓Diluent 3（无色，稀释检测抗体）、洗板液（Washing Buffer 20X）、Read Buffer T（4X）、96孔石墨电极板等。另外，准备去离子超纯水约200ml。
血清样本稀释：在涡旋仪上混匀血清样本，准备88个1.5ml离心管，做好标记，每管加入60ul 抗体稀释液Diluent 2。然后，将混匀的60ul的血清加入到60ul Diluent 2中，进行1:1稀释（每个样本都要更换枪头）。剩余的血清放回冰箱，-80°C保存。
10种检测抗体稀释：将10种炎症因子的检测抗体原液以每种60ul（注意每次取用更换枪头），加入到2400ul的稀释液Diluent 3中，比例1:50。
配制Read buffer T工作液（无色，4X）：取50ml离心管，加入30ml去离子超纯水，加入10ml Read Buffer T原液（用1000ul的移液器取3次，7次文字说明），盖紧瓶盖，上下颠倒混匀15-20次，充分混匀。
步骤8：
实验操作（2）：掌握倍比稀释发的原理、方法
稀释标准品：标准品中加入1000ul稀释液Diluent 2，静置自然溶解后，用1ml移液器吹吸5-8次混匀，成为抗体原液。准备8个1.5ml离心管，标记为1-8，然后进行4倍倍比稀释6个浓度。具体操作见倍比稀释示意图：取500ul抗体原液放入第1管，其余7管中加入300ul Diluent 2；从第1管取100ul的标准品原液加入第2管，移液器吹吸吹吸5-8次混匀；从第2管取100ul的标准品原液加入第3管，移液器吹吸吹吸5-8次混匀；........依次类推，直到第7管，第7管移液器吹吸吹吸5-8次混匀。第8管抗体标准品浓度为0pg/ml。
重点掌握下图右侧的倍比稀释公式，并能灵活运用于后续的血清样本稀释。
关于倍比稀释公式的使用方法：根据实际情况，把需要保留的溶液体积（V留）和稀释倍数（n）代入公式，即可计算每次转移的体积（V移）。例如，本项目中需要标准品溶液保留体积为90微升（V留=90），10倍倍比稀释（n=10），可以计算转移体积为（V移）10微升。在实际操作中，可以预先在每个试管中加入90微升液体，取10微升母液加入第1管，混匀；从第1管取10微升母液加入第2管，混匀；从第2管取10微升母液加入第3管，混匀；以此类推，可以做多个浓度梯度溶液。
步骤9：
实验操作（3）：掌握血清样本的检测前准备
血清样本稀释：在涡旋仪上混匀血清样本，准备88个1.5ml离心管，做好标记，每管加入60ul 抗体稀释液Diluent 2。然后，将混匀的60ul的血清加入到60ul Diluent 2中，进行1:1稀释（每个样本都要更换枪头）。剩余的血清放回冰箱，-80°C保存。
步骤10：
实验操作（4）：掌握MSD免疫电化学检测的操作流程和细节原理
（1）加样：取出96孔石墨电极板（96孔板示意图），第1列（A1、B1....H1）8孔加入标准品溶液，每孔50ul；其余88孔加入稀释的血清样本50ul。在板上粘上密封膜，室温密封孵育2h。
（2）洗板：室温孵育期间，配制洗板液：取2.5ml洗板液（Washing Buffer 20X），加入50ml离心管，再加入去离子超纯水至50ml，充分混匀。
孵育完毕，弃去孔中液体，在吸水纸（滤纸）上拍3-5下，尽可能弃去所有液体。然后，按照150ul/孔，用排枪加入洗板液，加完后静置2min，弃去液体，在吸水纸上拍3-5下；重复洗3次（使用200ul排枪，增加缓冲液槽）。
（3）加检测抗体溶液：按照25ul/孔，使用排枪加入检测抗体溶液，室温孵育2h。
（4）洗板：同步骤（2）
（5）读数：完成步骤（3）后，提前0.5h打开超敏多因子电化学发光分析仪。
其中，采用动画原理示意图，展示移液器操作96孔板时，可能对抗原抗体结合反应的影响。如下图，如果操作室，移液器不小心触碰96孔板的孔底部，则造成扳底包被抗体的损伤和丢失。下图用动画示意图显示扳底包被10种不同颜色抗体，如果移液枪头碰到扳底，则显示抗体掉下来。
最后，按照150ul/孔，使用排枪加入Read buffer T。通过MSD成像仪2400自带软件，采集96孔中10种炎症因子的荧光强度，根据8个标准品检测孔绘制标准曲，采用自参数拟合算法，计算各孔中10种种炎症因子的浓度。
步骤11：
实验操作（5）：掌握数据处理的原则、方法和一般统计分析
根据实际操作情况，获得每位同学的虚拟检测数据，简单介绍数据处理的一般方法、原理和SPSS软件的分析步骤。
根据统计分析结果，结合文献和教材，进行简要描述和解释，示例如下：
通过清肺排毒汤治疗新型冠状病毒肺炎患者，与治疗前相比，患者血清中IL-1β、IL-6、TNF-α显著下降，具有显著统计学差异（P < 0.05）。细胞因子是一类以细胞自分泌或旁分泌方式产生的小分子糖蛋白，白细胞介素（Interleukin，IL）、干扰素（Interferon，IFN）和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）是重要的促炎细胞因子，由多种细胞产生，对免疫应答、急性期反应、炎症等有多方面调控作用。
新型冠状病毒感染后刺激机体免疫细胞释放多种炎症因子，引起体温升高和多组织器官炎性病理损伤。其中，IL-6和TNF-α重要的内源性热原质，作用于下丘脑体温调节中枢，导致体温升高，清肺排毒汤治疗可显著下调血清IL-6和TNF-α水平，与患者痊愈后体温恢复正常相关。
细胞因子可以通过自分泌、旁分泌和内分泌发挥网络调节作用，TNF-α是激活炎症反应的初级因子,也是机体维持内部自稳、抵御各种致病因子必不可少的免疫调节因子。
TNF-α大量分泌可诱发血管内皮细胞及微循环炎症改变，如果在局部发挥作用，对控制炎症和感染有利；如果全身发挥作用，则造成机体损伤。IL-1β的生物活性与TNF-α十分相似，对巨噬细胞及中性粒细胞有趋化和粘附作用, 可增强血管通透性,并促进TNF-α所导致的组织损伤。IL-6不仅对血管内皮细胞及炎症细胞具有直接激活和毒性作用外，还是诱导急性期蛋白合成分泌的关键因子，促进肝细胞分泌急性期蛋白（C-反应蛋白），导致血清C-反应蛋白水平升高，是机体炎症的重要标志分子。因此，清肺排毒汤治疗降低新型冠状病毒患者血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平，与抑制机体炎症相关。
步骤12：
实验操作（6）：完成实验考核，掌握MSD免疫电化学发光检测技术的原理和优势。最后生成一份可手写的实验报告，可以根据任课教师的需要进行合理评价给分，为线上线下混合教学提供评价载体。